企业是否应当负责对道路运输车辆实行定时更新？

从法律层面来看，企业在道路运输车辆管理方面确实有一定的责任，其中可能涉及到对车辆的定时更新，但这需要依据具体的法律法规和实际情况来判断。

《中华人民共和国道路运输条例》中虽然没有明确直接规定企业必须对道路运输车辆实行定时更新，但对运输车辆的技术管理和安全性能有着严格要求。根据交通运输部发布的《道路运输车辆技术管理规定》，道路运输经营者应当建立车辆技术档案制度，实行一车一档；应当按照国家有关规定和车辆使用说明书的要求，对车辆进行维护作业。同时，要依据国家有关标准和车辆维修手册、使用说明书等，结合车辆类别、车辆运行状况、行驶里程、道路条件、使用年限等因素，自行确定车辆维护周期，确保车辆正常维护。

另外，对于达到一定使用年限或者行驶里程的道路运输车辆，根据《机动车强制报废标准规定》，如果经修理和调整仍不符合机动车安全技术国家标准对在用车有关要求的，经修理和调整或者采用控制技术后，向大气排放污染物或者噪声仍不符合国家标准对在用车有关要求的，在检验有效期届满后连续3个机动车检验周期内未取得机动车检验合格标志的，都应当强制报废。在这种情况下，企业为了继续合法从事道路运输经营活动，就需要对车辆进行更新。

虽然没有严格意义上的“定时更新”规定，但企业基于法律法规对车辆技术状况、安全性能等方面的要求，实际上需要在车辆不能满足运营要求时及时进行更新，以保障运输安全和符合法律规定。否则，若企业使用不符合规定的车辆进行运输，可能会面临行政处罚等法律后果。